三步法染色液组成：

石碳酸复红溶液

（R1）1份

盐酸酒精溶液

（R2）2份

美蓝溶液

（R2）1份

  三步法染色液性状：

R1为红色液体

R2为无色液体

R3为蓝色液体

  冷染法（三步法）：

a)涂片自然干燥后，放置在染色架上，玻片间距保持10 mm以上距离；火焰固定（玻片在火焰上快速通过4次）。

b)滴加R1染色5～10分钟（不需加热），水洗。

c)滴加R2脱色3～5分钟，至无红色，水洗。

d)滴加R3复染30秒钟，集菌涂片复染1～3分钟，水洗，待干镜检。