在酸性条件下，细胞内酸性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成不溶性有色产物，定位于细胞质中。
酸性磷酸酶（ACP）阳性颗粒为红色。
1.巨噬细胞、部分网状细胞呈较强阳性反应；
2.单核细胞、T淋巴细胞、浆细胞呈中等强度阳性；
3.粒细胞、巨核细胞、血小板为阴性或弱阳性；
4.红细胞系统、B淋巴细胞呈阴性反应；
5.大多数组织中的细胞含有酸性磷酸酶，尤其前列腺细胞中此酶活性最强；
6.毛细胞白血病的毛细胞ACP染色多呈强阳性或中度阳性，且不被L-酒石酸抑制，其他细胞酒石酸抑制后均为阴性或极弱的阳性。
